Avaliação sensitiva, motora e cistométrica de cães com lesão medular crônica, submetidos ao transplante de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo / Sensory, motor and cystometric evaluation of dogs with chronic spinal cord injury submitted to mesenchymal stem cell transplantation

A utilização de células-tronco na reparação de lesões tem sido extensivamente investigada. Neste estudo, examinamos os efeitos terapêuticos de dois transplantes (12x106 céls/transplante) de células-tronco mesenquimais alogênicas derivadas do tecido adiposo (CTDAs) em 11 cães com lesões crônicas traumáticas toracolombares da medula espinhal. As CTDAs foram foram cultivadas in vitro, a proliferação e a viabilidade foram avaliadas. As suspensões foram expandidas e administradas no espaço intradural com intervalo de uma semana entre transplantes. Os cães foram submetidos à avaliações clínicas, laboratoriais, radiográficas, tomográficas, sensitivas, motoras e cistométricas. A maioria dos animais não tinha raça definida (63,63%), mesma proporção para o acometimento de fêmeas e foi observada predominância de fratura com subluxação vertebral (81,81%). Na comparação dos cães pré e pós-transplante não foram observadas alterações hematológicas e três animais (27,27%) apresentaram cistite bacteriana. Em relação a sensibilidade, motricidade e cistometria, também não houve alterações significativas dos índices antes e pós transplantes, sendo observado a ausência nociceptiva na maioria dos animais (72,73%), paraplegia e incontinência urinária na mesma proporção. Neste estudo concluiu-se que o protocolo utilizado de transplante de CTDAs, demonstrou ser um tratamento seguro para cães com lesão medular crônica, com melhora discreta da funcionalidade vesical, porém sem melhora clínica significativa.(AU)

The use of stem cells in injury repair has been extensively investigated. In this study, we examined the therapeutic effects of two transplants (12x106 cells/transplantation) of allogenic adipose-derived stem cells (ASCs) in 11 dogs with chronic spinal cord injury. ASC were cultured in vitro, proliferation and cell viability were evaluated. Cell suspensions were prepared and administered in the intradural space, with a one-week interval between transplants. The animals were submitted to clinical, laboratory, radiographic, tomographic, sensory, motor and cystometric evaluations. Most of the animals were not a breed defined (63.63%), the same proportion for females affected, predominance of vertebral subluxation fracture was observed (81.81%). Before and after the transplants no hematological changes were observed, three animals (27.27%) presented bacterial cystitis, and in relation to motor, cystometry and sensitivity, no improvement was observed; the rates were maintained before and after transplants, predominance of nociceptive absence in most animals (72.73%), and paraplegia and urinary incontinence in the same proportion. In this study it was concluded that the use of ADSCs for the treatment of dogs with chronic spinal cord injury is safe, with a slight improvement in bladder function, but without significantly clinical improvement.(AU)

Morphology and morphometry of feline bone marrow-derived mesenchymal stem cells in culture / Morfologia e morfometria das células-tronco mesenquimais isoladas de medula óssea de gato

Mesenchymal stem cells (MSC) are increasingly being proposed as a therapeutic option for treatment of a variety of different diseases in human and veterinary medicine. Stem cells have been isolated from feline bone marrow, however, very few data exist about the morphology of these cells and no data were found about the morphometry of feline bone marrow-derived MSCs (BM-MSCs). The objectives of this study were the isolation, growth evaluation, differentiation potential and characterization of feline BM-MSCs by their morphological and morphometric characteristics. in vitro differentiation assays were conducted to confirm the multipotency of feline MSC, as assessed by their ability to differentiate into three cell lineages (osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes). To evaluate morphological and morphometric characteristics the cells are maintained in culture. Cells were observed with light microscope, with association of dyes, and they were measured at 24, 48, 72 and 120h of culture (P1 and P3). The non-parametric ANOVA test for independent samples was performed and the means were compared by Tukey's test. On average, the number of mononuclear cells obtained was 12.29 (±6.05x106) cells/mL of bone marrow. Morphologically, BM-MSCs were long and fusiforms, and squamous with abundant cytoplasm. In the morphometric study of the cells, it was observed a significant increase in average length of cells during the first passage. The cell lengths were 106.97±38.16µm and 177.91±71.61µm, respectively, at first and third passages (24 h). The cell widths were 30.79±16.75 µm and 40.18±20.46µm, respectively, at first and third passages (24 h).The nucleus length of the feline BM-MSCs at P1 increased from 16.28µm (24h) to 21.29µm (120h). However, at P3, the nucleus length was 26.35µm (24h) and 25.22µm (120h). This information could be important for future application and use of feline BM-MSCs.(AU)

As células tronco mesenquimais são utilizadas na terapia de várias doenças na medicina humana e veterinária. As células tronco foram isoladas da medula óssea de gato, entretanto, existem poucos dados referentes a morfologia e não existem informações sobre a morfometria das células tronco isoladas da medula óssea. Os objetivos do presente estudo foram o isolamento, avaliação do crescimento, potencial de diferenciação e caracterização morfológica e morfométrica das células mesenquimais de gato isoladas de medula óssea. A diferenciação in vitro foi realizada para confirmar a multipotencialidade das células mesenquimais de gato (diferenciação em osteoblastos, condrócitos, adipócitos). As células mesenquimais foram mantidas em cultivo para avaliações morfológica e morfométrica. As células foram coradas e observadas em microscopia ótica. As mensurações foram realizadas com 24, 48, 72 e 120h de cultura (primeira e terceira passagens). O teste não paramétrico ANOVA foi utilizado e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey. O número médio de células mononucleares obtido foi de 12,29 (±6,05x106) células/mL de medula óssea. As células mesenquimais são longas e fusiformes, e escamosas com citoplasma abundante. No estudo morfométrico, observou-se aumento no comprimento médio das células durante a primeira passagem. As medidas de comprimento das células foram: 106,97±38,16µm e 177,91±71,61µm, respectivamente, na primeira e terceira passagens (24 horas). As medidas de largura das células foram: 30,79±16,75 µm e 40,18±20,46 µm, respectivamente, na primeira e terceira passagens (24 horas). O comprimento do núcleo na primeira passagem aumentou de 16,28µm (24h) para 21,29µm (120h) e na terceira passagem foi de 26,35µm (24h) para 25,22µm (120h). As informações são importantes para futuras aplicações e uso da célula mesenquimal de gato.(AU)

Expansão de células-tronco da medula óssea e do sangue de cordão umbilical humano / Expansion of stem cells from bone marrow and human umbilical cord blood

Células-tronco/progenitoras frequentemente não estão disponíveis em quantidade suficiente para restauração de órgãos e tecidos danificados, sendo necessária sua expansão in vitro. Instalações físicas adequadas, pessoal técnico qualificado, reagentes de grau clínico e protocolos bem definidos de acordo com as condições de boas práticas de fabricação são imprescindíveis para assegurar a qualidade e segurança das células infundidas no paciente. A medula óssea e o sangue de cordão umbilical ainda são as fontes de células mais utilizadas em terapias. Protocolos bem sucedidos de expansão utilizando células-tronco hematopoéticas, células-tronco mesenquimais e células progenitoras endoteliais já têm sido empregados em estudos pré-clínicos e clínicos. A escolha do tipo celular adequado deve ser direcionada pelo tamanho da lesão ou natureza do tecido tratado e pelo efeito terapêutico desejado. Estudos recentes têm demonstrado que propriedades de diferentes células expandidas in vitro podem ser combinadas para obtenção de um resultado melhor no tratamento de algumas doenças. Células em culturas de longo termo precisam ser acompanhadas por meio de diversas técnicas de citogenética clássica e molecular para demonstrar que não há evidências de transformação espontânea ou sinais de imortalização. Ensaios utilizando a infusão de células expandidas através da barreira alogeneica e xenogeneica, apresentaram melhora funcional e foram alcançados sem imunossupressão e sem evidências de infiltrados celulares que indicariam resposta imune. Porém, mais estudos precisam ser realizados para avaliar a imunogenicidade destas células e garantir a segurança da terapia celular alogênica permitindo sua consolidação no uso clínico. Aqui apresentamos uma atualização sobre expansão celular associada com seu uso clínico.

Stem/progenitor cells are not frequently available in large enough amounts to repair damaged tissues and organs and so in vitro expansion is necessary. Appropriate facilities, qualified technicians, clinical-grade reagents and well defined protocols relating to good manufacturing products are essential to assure the quality and security of the cells injected in the patient. Bone marrow and human umbilical cord blood are still the best sources of cells for therapies. Successful expansion protocols using hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells and endothelial progenitor cells have already been used in clinical and pre-clinical trials. Adequate cell choice should consider the extent of injury or nature of the damaged tissue and the desired therapeutic effect. Recent studies have demonstrated that properties of different in vitro expanded cells can be combined aiming to improve the outcome of the treatment of some diseases. Long-term cell cultures need to be followed up by classical and molecular cytogenetic techniques to demonstrate that there is no evidence of spontaneous transformation or signs of immortalization. Assays using expanded cell infusions across both xenogeneic and allogeneic transplant barriers showed functional improvement and were achieved without immunosuppression and without evidence of a cellular infiltrate that would indicate an immune response. However, more research needs to be performed to evaluate the immunogenicity of these cells and to guarantee the safety of allogeneic cell therapy, allowing consolidation of their clinical use. Here, we present an update regarding cellular expansion associated with their clinical use.

Six-minute walk test and quality-of-life in heart failure: a correlative study with a Brazilian sample / Test de la caminata de seis minutos y calidad de vida en insuficiencia cardíaca: un estudio correlativo con una muestra brasileña / Teste de caminhada de seis minutes e qualidade de vida na insuficiência cardíaca: Um estudo correlativo com uma amostra brasileira

Background. Quality-of-life and functional capacity in heart failure are, actually, between the most investigated topics in the scientific community. Patient's self perceptions and exercise capacity can help health professionals with prognosis and decisions in heart failure treatment. Specifically in Brazil, the research on quality-of-life still needs to focus on the differences in the multifactor aspects of heart failure. The aim of this study is to investigate the correlation between quality-of-life and functional capacity in a sample of Brazilian heart failure patients. Methods. 30 male heart failure patients were included in the study. Quality-of-life was assessed by the Brazilian version of the Minnesota Living with Heart Failure Questionnaire and the functional capacity through the six-minute walk test. Differences in quality-of-life among the functional classes were evaluated through the analysis of variance and the association between the variables was assessed through Pearson's coefficient. Results. Quality-of-life decreased significantly according to functional class (functional class I= 20±11, class II= 35.9±18 and class III= 58.3±24) and correlated significantly to the distance (r=-0.62, p=0.004). Conclusions. Longer distances obtained in the six-minute walk test can be interpreted as a better quality-of-life in Brazilian heart failure patients.

Fundamentação. Qualidade-de-vida e capacidade funcional na insuficiência cardíaca estão, atualmente, entre os tópicos mais investigados na comunidade científica. As autopercepções e a capacidade de exercício dos pacientes podem ajudar as profissionais de saúde com o prognóstico e as decisões no tratamento da insuficiência cardíaca. Especificamente no Brasil, a pesquisa em qualidade-de-vida ainda precisa focar nas diferenças nos aspectos multifatoriais da insuficiência cardíaca. O objetivo deste estudo foi investigar a correlação entre qualidade-de-vida e capacidade funcional em uma amostra brasileira de pacientes com insuficiência cardíaca. Métodos. Foram incluídos no estudo trinta pacientes masculinos com insuficiência cardíaca. A qualidade-de-vida foi avaliada pela versão brasileira do Questionário Minnesota Living With Heart Failure e a capacidade funcional pelo teste de caminhada de seis minutos. Foram avaliadas diferenças em qualidade-de-vida entre as classes funcionais pela análise de variância, e a associação entre as variáveis foi avaliada pelo coeficiente de Pearson. Resultados. A qualidade-de-vida diminuiu significativamente de acordo com classe funcional (classe funcional I=20±11, classe II=35,9±18 e classe III=58,3±24) e correlacionou-se significativamente com a distância (r=0,62, p=0,004). Conclusões. Distâncias mais longas obtidas no Teste de caminhada de seis minutos podem ser interpretadas como uma qualidade-de-vida melhor em pacientes de parada cardíaca brasileiros.

Avaliação do sensor de contratilidade cardíaca em sistema DDDR - estudo multicêntrico / Cardiac contractility sensor avaluation in a DDDR system - multicentric study

Neste estudo empregou-se um sistema de estimulação DDDR, cujo indicador que controla o sensor é o estado contrátil do miocárdio. Foram 85 pacientes portadores de doença no sistema de condução cardíaca distribuídos por 15 centros de implante no Brasil. Utilizando um parâmetro do próprio controle cardíaco vascular (contratilidade cardíaca obtida pela medida da impedância intracardíaca unipolar), a adaptação da frequência cardíaca é realizada num sistema de malha fechada, possibilitando teoricamente um ajuste a todas as necessidades fisiológicas. O objetivo principal foi avaliar a resposta de freqüência do marcapasso em situações de esforço físico e mental, tanto em ambulatório (teste de esforço e estresse mental), como em atividades diárias do paciente. A programação e a calibração do sistema foram realizadas 30 dias após o implante (tempo de maturação da interface coração-eletrodo). Além das avaliações dos limiares de estimulação e sensibilidade atriais e ventriculares, foram realizados testes de estresse mental (matemático e de percepção) e teste ergométrico, monitorizados com histogramas de freqüência gravados pelo próprio marcapasso. A média dos limiares agudos de estimulação foi de 0,76Ý0,40Volts e 0,52Ý0,35Volts, de sensibilidade foi 2,59Ý1,49mV e 11,79Ý4,92mV e a da impedância foi 567Ý119 Ohms e 628Ý139 Ohms, para átrios e ventrículos, respectivamente. A média dos limiares crônicos de estimulação foi 1,34Ý0,64Volts e 1,10Ý0,57Volts e a dos de sensibilidade foi 2,82Ý1,79mV e 6,62Ý1,36mV respectivamente para átrios e ventrículos. A freqüência cardíaca variou de 5 a 160por cento nas atividades físicas e de 3 a 79por cento nas atividades mentais, com elevação apropriada logo no início da atividade. Conclui-se pela excelente performance do sensor estudado, permitindo uma adaptação de freqüência muito semelhante à do sistema nervoso autonômico de indivíduos normais